期刊简介
本刊是概括临床医学各学科的省级综合性期刊，是传播、交流临床医学科学知识先进的实践经验为办刊宗旨，中西医结合、面向临床，服务基层。
往期目录
-
2000
-
2001
-
2002
-
2003
-
2004
-
2005
-
2006
-
2007
-
2008
-
2009
-
2010
-
2011
-
2012
-
2013
-
2014
-
2015
-
2016
-
2017
-
2018
-
2019
首页>浙江临床医学杂志
- 杂志名称：浙江临床医学杂志
- 主管单位：浙江省教育厅
- 主办单位：浙江中医药大学 浙江省科普作家协会医学卫生委员会
- 国际刊号：1008-7664
- 国内刊号：33-1233/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：上海图书馆馆藏, 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 万方收录(中), 知网收录(中)
应用CRISPR/Cas9慢病毒系统建立Nestin基因敲除的小鼠肾足细胞系
王璐萍；陶颖莉；黄平
关键词：CRISPR/Cas9, Nestin基因敲除, 小鼠肾足细胞
摘要：目的 基于CRISPR/Cas9系统构建稳定敲除Nestin基因的条件永生性小鼠肾足细胞株(mouse podocyte,MP).方法 利用Cas9过表达慢病毒构建条件性永生小鼠足细胞Cas9过表达稳转细胞系(CAS9/MP).设计Nestin基因的3个位点(KO1、KO2、KO3),并构建3对靶向Nestin基因的sgRNA寡核苷酸序列,将其连接进GV371质粒中,测序验证后,包装慢病毒颗粒,感染构建好的CAS9/MP,嘌呤霉素筛选(Puromycin)阳性克隆细胞,Cruiser TM酶切检测CAS9-sgRNA对目的基因的剪切活性.结果 成功构建了CAS9/MP及GV371-Nes-sgRNA重组载体,CruiserTM酶法验证表明,CAS9-sgRNA2具有剪切活性.结论 建立能稳定敲除Nestin基因的CRISPR/Cas9慢病毒系统,成功获得Nestin敲除的MP稳转细胞株.为进一步研究Nestin在足细胞中的作用机制奠定基础.
友情链接