期刊简介
本刊是概括临床医学各学科的省级综合性期刊，是传播、交流临床医学科学知识先进的实践经验为办刊宗旨，中西医结合、面向临床，服务基层。
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首页>浙江临床医学杂志
- 杂志名称：浙江临床医学杂志
- 主管单位：浙江省教育厅
- 主办单位：浙江中医药大学 浙江省科普作家协会医学卫生委员会
- 国际刊号：1008-7664
- 国内刊号：33-1233/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：上海图书馆馆藏, 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 万方收录(中), 知网收录(中)
抑癌基因TCF21重组腺病毒载体的构建及鉴定
陈碧玉；唐以军
关键词：细菌, 同源重组, 重组腺病毒质粒
摘要：目的：利用大肠杆菌BJ5183细菌内同源重组法构建重组腺病毒pAd-TCF21载体。方法设计TCF21cDNA 扩增引物，从真核表达载体pCMV-SPORT6.1-TCF21中扩增TCF21的DNA序列，与腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV进行连接，构成穿梭质粒pAdTrack-TCF21；然后再用经PmeI酶线性化的pAdTrack-TCF21转化含pAdeasy-1的超感受态AdBJ5183，采用细菌内同源重组法构建腺病毒质粒pAd-TCF21；筛选同源重组质粒阳性克隆，提取pAd-TCF21质粒经PacI酶切鉴定和PCR鉴定。结果线性化的pAdTrack-TCF21转化含pAdeasy-1的超感受态AdBJ5183，12~20h后获得了40%阳性重组质粒克隆，经酶切获得>23kb的大片段和3.0 kb的特征性片段，PCR反应扩增出了540bp的片段，证明重组腺病毒质粒中已成功插入目的基因TCF21。结论细菌内同源重组法成功构建了含TCF21基因的重组腺病毒质粒，为下一步腺病毒介导的TCF21转染A549细胞的研究打下基础。
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